发布日期:2023-09-20
核心提示: 2023年8月06日经国家标准化管理委员会,国家市场监督管理总局批准发布gb/t 13093-2023 《饲料中细菌总数的测定》标准,代替
 2023年8月06日经国家标准化管理委员会,国家市场监督管理总局批准发布gb/t 13093-2023 《饲料中细菌总数的测定》标准,代替实施17年之久的gb/t 13093-2006 《饲料中细菌总数的测定》 新标准将于2024年3月1日起正式实施。 


gb/t 13093-2023标准历时3年,经过成立标准修改小组、搜集样品、确定实验方案、实验验证、意见征求、评审等,最终大功告成。

 

一、本标准与gb/t 13093-2006 相比,主要修订内容见表1:


表1:主要修订内容

 

二、主要修订内容实验分析综述

(一)培养基的确定

国内外标准用于测定细菌总数的培养基是平板计数琼脂培养基(pca)和营

养琼脂培养基(na)两种,我们对两种培养基的成分进行了比较,见表2。

国内外测定细菌总数测定的培养温度和培养时间,见表3。


表2 用于细菌总数测定的培养基

表3 国内外细菌总数测定用的培养基、培养温度、培养时间


 

从表2 中可以看出,pca 里的胰蛋白胨比na 里的蛋白胨是更优质的“食

物”,葡萄糖更适合细菌生长。平板计数琼脂(pca)生长的菌落不容易运动,不容易造成蔓延,无法计数的现象。

从表3 中可以看出,国内外除了我们现修订的饲料标准和环保行业的两个标准外,其余都是使用pca 培养基。


 




 

两种培养基相同条件下和不同条件下的比较,见表4~表5。

表4 na 和pca 培养基相同条件下的比较

表5 na 和pca 培养基不同条件下的比较

 

根据表4来看,在相同条件下使用na和pca培养基的实验室结果,经过统计学的t检验分析,p=0.3917。根据这个结果可以得出结论,na和pca培养基之间的差异并不显著


根据表5来看,在不同条件下使用na和pca培养基的实验结果,经过统计学的t检验分析,p=0.9296根据这个结果可以得出结论,na和pca培养基之间的差异并不显著


从以上结果可以看出,不管是方法相同和不同,差异都不显著(p>0.05),特别是不同的检测方法,差异更不显著(p=0.9296)。同时,在重复几百次试验后,pca 培养基上细菌生长会更好,因平板计数琼脂(pca)生长的菌落不容易运动,不容易造成蔓延,无法计数的现象。

 


再者说,gb 4789.2-2022《食品微生物学检验菌落总数的测定》、

iso 4833-2013 《microbiology of the food chain — horizontal method for theenumeration of microorganisms》的检测方法,以及aoac、fda、as 等方法和国内进出口检验的方法,都是使用pca 培养基。

所以,根据实验结果,以及参考其它行业国家标准,最终培养基修改为平板计数琼脂培养基(pca),与国内外接轨。


(二)培养温度的确定

 

23 个不同种类样品的30℃和36℃培养温度进行实验比较,见表6

表6 pca 培养基30℃和36℃

 

实验结果从表6中可以看出, pca 培养基用30℃和36℃ 分别培养48 小时,70%的结果基本相同或高于30℃的结果;相对标准偏差rsd 在0%~2.5%之间;对两组数据进行了统计学的t 检验分析,p=0.1552,两者之间差异不显著;微生物细菌的生长温度也是36℃最为适宜;

 

同时gb 4789.2-2022《食品微生物学检验菌落总数的测定》,用36℃培养更加反应样品的菌落情况。考虑到大部分细菌(益生菌)都是用36℃温度培养,省去了检测单位培养箱的单独设置和检定。因此,本标准的培养温度也定为36℃。

 

(三)培养时间的确定


23 个不同种类的样品的培养时间的比较,见表7。


表7 pca 培养基36℃,48h 和72h 比较

 

实验结果从表7中可以看出, pca 培养基36℃ 分别培养48h 和72h 后,

两个培养时间的结果基本相同,对两组数据进行了统计学的t 检验分析,

p=0.7806,两者之间差异不显著。同时gb 4789.2-2022《食品微生物学检验菌落总数的测定》和进出口食品、aoac 和fda,都是36℃,培养48 h,

并考虑到时长和简便性。因此,本标准的培养时间也定为48 h。


(四)细菌总数的计算公式

 

原标准的计算公式是两个稀释度进行比较,若比值小于2取平均数,若大于2取稀释倍数低的。现依据统计学的原理,计算公式中增加了修正因子,国际标准和食品标准,更加合理和准确,并对不同含量和不同稀释度可能出现的结果给出了实例,便于操作者使用。

 




 

细菌总数的报告,增加了修约的描述,以及空白试验的要求。使操作者一目了然,更加合理,并规范了文本。

具体修改如下:


1.若只有一个稀释度平板上的细菌数在适宜计数范围内,计算两个平板细菌数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每g(ml)样品中细菌总数结果。


上述数据按9.2.2数字修约后,表示为16000或1.6×104。


2.若有两个连续稀释度的平板细菌数在适宜计数范围内时,按下列公式计算:

 

3.若所有稀释度的平板上细菌数均大于300 cfu,则对稀释度最高的平板进行计数,其他平板可记录为多不可计,结果按平均细菌数乘以最高稀释倍数计算。

 

4.若所有稀释度的平板细菌数均小于30 cfu,则应按稀释度最低的平均细菌数乘以稀释倍数计算。

 

5.若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无细菌生长,则以小于1乘以最低稀释倍数计算。

 

6.若所有稀释度的平板细菌数均不在30 cfu~300 cfu之间,其中一部分小于30 cfu或大于300 cfu时,则以最接近30 cfu或300 cfu的平均细菌数乘以稀释倍数计算。

编辑:songjiajie2010

 
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