发布日期:2012-06-15  来源:生物在线
核心提示:实验室常用贮存液的配制
 1.30%丙烯酰胺溶液
『配制方法』将29g丙烯酰胺和1g n,n’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中. 加热至37℃溶解之,补加水至终体积为100ml.用0.45μm孔径滤器过滤除菌,查证该溶液的ph值应不大于7.0,置棕色瓶中保存于室温.
→〖注意〗丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收,其作用具累积性. 称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具. 可认为聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作. 因为它还可能会含有少量未聚合材料. 有些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子,在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂(mb-1mallinckrodt),搅拌过夜,然后过滤以纯化之(建议使用whatman 1号滤纸过滤,鸿跃公司有售). 在贮存期间,丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸.
2.40%丙烯酰胺
『配制方法』把380g丙烯酰胺(dna测序级)和20g n,n’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中. 继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理,但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1l.
→〖注意〗见上述配制30%丙烯酰胺的说明,40%丙烯酰胺溶液用于dna序列测定.
3.放线菌素d溶液
『配制方法』把20mg放线菌素d溶解于4ml 100%乙醇中,1:10稀释贮存液,用100%乙醇作空白对照读取od440值. 放线菌素d(分子量为1255)纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21,900,故而1mg/ml的放线菌素d溶液在440nm处的吸光值为0.182,放线菌素d的贮存液应放在包有箔片的试管中,保存于-20℃.
→〖注意〗放线菌素d是致畸剂和致癌剂,配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作,而不能在开放在实验桌面上进行,谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤.
另,药厂提供的作治疗用途的放线菌素d制品常含有糖或盐等添加剂. 只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素d的浓度,这类制品便可用于抑制自身引导作用.
4.0.1mol/l腺苷三磷酸(atp)溶液
『配制方法』在0.8ml水中溶解60mg atp,用0.1mol/l naoh调至ph值至7.0,用蒸馏水定容1ml,分装成小份保存于-70℃.
5.10mol/l乙酸酰溶液
『配制方法』把770g乙酸酰溶解于800ml水中,加水定容至1l后过滤除菌.
6.10%过硫酸铵溶液
『配制方法』把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中,该溶液可在4℃保存数周.
7.bcip溶液
『配制方法』把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐(bcip)溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃.
8.2×bes缓冲盐溶液
『配制方法』用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液bes[n,n-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸]、1.6g nacl和0.027g na2hpo4,室温下用hcl调节该溶液的ph值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成小份,保存于-20℃.
9.1mol/l cacl2溶液
『配制方法』在200ml蒸馏水中溶解54g cacl2•6h2o,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成10ml小份贮存于-20℃.
→〖注意〗制备感受态细胞时,取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml,用nalgene滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,然后骤冷至0℃.
10.2.5mol/l cacl2溶液
『配制方法』在20ml蒸馏水中溶解13.5g cacl2?6h2o,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃.
11.1mol/l二硫苏糖醇(dtt)溶液
『配制方法』用20ml 0.01mol/l乙酸钠溶液(ph5.2)溶解3.09g dtt,过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃.
→〖注意〗dtt或含有dtt的溶液不能进行高压处理.
12.脱氧核苷三磷酸(dntp)溶液
『配制方法』把每一种dntp溶解于水至浓度各为100mmol/l左右,用微量移液器吸取0.05mol/l tris碱分别调节每一dntp溶液的ph值7.0(用ph试纸检测),把中和后的每种dntp溶液各取一份作适当稀释,在给出的波长下读取光密度计算出每种dntp的实际浓度,然后用水稀释成终浓度为50mmol/l的dntp,分装成小份贮存于-70℃.
13.0.5mol/l edta(ph8.0)溶液
『配制方法』在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠(edta-na2•2h2o),在磁力搅拌器上剧烈搅拌,用naoh调节溶液的ph值至8.0(约需20g naoh颗粒)然后定容至1l,分装后高压灭菌备用.
→〖注意〗edta二钠盐需加入naoh将溶液的ph值调至接近8.0,才能完全溶解.
14.溴化乙锭(10mg/ml溶液)
『配制方法』在100ml水中加入1g溴化乙锭,磁力搅拌数小时以确保其完全溶解,然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中,保存于室温,
→〖注意〗溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性,使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套,称量染料时要戴面罩.
15.2×hepes缓冲盐溶液
『配制方法』用总量为90ml的蒸馏水溶解1.6g nacl、0.074g kcl、0.027g na2po4•2h2o、0.2g葡聚糖和1ghepes,用0.5mol/l naoh调节ph值至7.05,再用蒸馏水定容至100ml. 用0.22μm滤器过滤除菌,分装成5ml小份,贮存于-20℃.
16.iptg溶液
『配制方法』iptg为异丙基硫代-β-d-半乳糖苷(分子量为238.3),在8ml蒸馏水中溶解2g iptg后,用蒸馏水定容至10ml,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃.
17.1mol/l乙酸镁溶液
『配制方法』在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁,用水定容至1l过滤除菌.
18.1mol/l mgcl2溶液
『配制方法』在800ml水中溶解203.4g mgcl2•6h2o,用水定容至1l,分装成小份并高压灭菌备用. 
→〖注意〗mgcl2极易潮解,应选购小瓶(如100g)试剂,启用新瓶后勿长期存放.
19.β-巯基乙醇(bme)溶液
『配制方法』一般得到的是14.4mol/l溶液,应装在棕色瓶中保存于4℃.
→〖注意〗bme或含有bme的溶液不能高压处理.
20.nbt溶液
『配制方法』把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃.
21.酚/氯仿溶液
『配制方法』把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/l tris?hcl(ph7.6)抽提几次以平衡这一混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆盖等体积的0.01mol/l tris?hcl(ph7.6)液层,保存于4℃.
→〖注意〗酚腐蚀性很强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜,穿防护服.所有操作均应在化学通风橱中进行.与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇.
22.10mmol/l苯甲基磺酰氟(pmsf)溶液.
『配制方法』用异丙醇溶解pmsf成1.74mg/ml(10mmol/l),分装成小份贮存于-20℃.如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液(100mmol/l).
→〖注意〗pmsf严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤,吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了pmsf,应立即用大量水冲洗之.被pmsf污染的衣物应予丢弃.pmsf在水溶液中不稳定. 应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中. pmsf在水溶液中的活性丧失速率随ph值的升高而加快,且25℃的失活速率高于4℃. ph值为8.0时,20μmmol/l pmsf水溶液的半寿期大约为85min,这表明将pmsf溶液调节为碱性(ph>8.6)并在室温放置数小时后,可安全地予以丢弃.
23.磷酸盐缓冲溶液(pbs)溶液
『配制方法』在800ml蒸馏水中溶解8g nacl、0.2g kcl、1.44g na2hpo4和0.24g kh2po4,用hcl调节溶液的ph值至7.4加水定容至1l,在15lbf/in2(1034×105pa)高压下蒸气灭菌20min. 保存于室温.
24.1mol/l乙酸钾(ph7.5)溶液
『配制方法』将9.82g乙酸钾溶解于90ml纯水中,用2mol/l乙酸调节ph值至7.5后加入纯水定容到1l,保存于-20℃.
25.乙酸钾溶液(用于碱裂解)
『配制方法』在60ml 5mol/l乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水,即成钾浓度为3mol/l而乙酸根浓度为5mol/l的溶液.
26.3mol/l乙酸钠(ph5.2和ph7.0)溶液
『配制方法』在80ml水中溶解408.1g三水乙酸钠,用冰乙酸调节ph值至5.2或用稀乙酸调节 ph值至7.0,加水定容到1l,分装后高压灭菌.
27.5mol/l nacl溶液
『配制方法』在800ml水中溶解292.2g nacl加水定容至1l,分装后高压灭菌.
28.10%十二烷基硫酸钠(sds)溶液
『配制方法』在900ml水中溶解100g电泳级sds,加热至68℃助溶,加入几滴浓盐酸调节溶液的ph值至7.2,加水定容至1l,分装备用.
→〖注意〗sds的微细晶粒易扩散,因此称量时要戴面罩,称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的sds,10%sds溶液无须灭菌
29.20×ssc溶液
『配制方法』在800ml水中溶解175.3g nacl和88.2g柠檬酸钠,加入数滴10mol/l naoh溶液调节ph值至7.0,加水定容至1l,分装后高压灭菌
30.20×sspe溶液
『配制方法』在800ml水中溶解17.5g nacl、27.6g nah2po4?h2o和7.4g edta,用naoh溶液调节ph值至7.4(约需6.5ml 10ml/l naoh),加水定容至1l,分装后高压灭菌.
31.100%三氯乙酸溶液
『配制方法』在装有500g tca的瓶中加入227ml水,形成的溶液含有100%(m/v)tca.
32.1mol/l tris溶液
『配制方法』在800ml水中溶解121.91g tris碱,加入浓hcl调节ph值至所需值. 应使溶液冷至室温后方可最后调定ph值,加水定容至1l,分装后高压灭菌.
→〖注意〗如1mol/l溶液呈现黄色,应予丢弃并置备质量更好的tris. tris溶液的ph值因温度而异,温度每升高1℃,ph值大约降低0.03个单位. 例如:0.05mol/l的溶液在5℃、25℃、和37℃时的ph值分别为9.5、8.9和8.6.
33.tris缓冲盐溶液(tbs)(25mmol/l tris)
『配制方法』在800ml蒸馏水中溶解8g nacl、0.2g kcl和3g tris碱,加入0.015g酚并用hcl调至ph值至7.4,用蒸馏水定容至1l,分装后在151bf/in2(1.034×105pa)高压下蒸汽灭菌20min,于室温保存.
34.x-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-d半乳糖苷)溶液
『配制方法』用二基甲酰胺溶解x-gal配制成的20mg/ml的贮存液.保存于一玻璃管或聚丙烯管中,装有x-gal溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏,并应贮存于-20℃. x-gal溶液无须过滤除菌.
编辑:songjiajie2010

 
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