一．开机程序
1．检查稳压器电源，打开电源，稳定5分钟。
2．打开储液箱，倒掉废液,
并在废液桶中加入400ml漂白水原液。打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至4/5满(一般可用三蒸水，做分选必须用pbs或facsflow)，合上压力阀。确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。
3．将facscalibur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是standby，预热5－10分钟。排出过滤器内的气泡。
4．如果需要打印，打开打印机电源。
5．打开电脑,等待屏幕显示出标准的苹果标志。
6．执行仪器prime功能一次，以排除flow cell中的气泡。
7．分析样品时，先用facaflow 或pbs进行high run约2分钟。
做过分选后，每次开机后需冲洗管道：向分选装置上装上两个50ml离心管，不接通浓缩系统，摁下右下角白色按钮开始冲洗。待自动停止
后接通浓缩装置，同上法冲洗一次。
后接通浓缩装置，同上法冲洗一次。
二．预设获取模式文件(acquisition template files)
1．从苹果标志中选择cellquest见一个新视窗，可利用此视窗编辑一个获取模式文件。
2．选取屏幕左列绘图工具中的dot plot，绘出一个或多个dot plots(点图)。从dot plot对话框中选取acquisition作为图形资料来源，并确定适当的x轴和y轴参数。
3．选取屏幕左列绘图工具中的histogram，同上法可绘出histogram(直方图)。
4．将此视窗命名后储存于facstation g3\bd applications \cellquest folder \exp文件夹中，下次进行相同实验时可直接调用。
本计算机中已设定两个模式文件：acq和exp，储存于facstation g3\bd applications \cellquest \exp文件夹中，acq用于细胞dna检测，exp用于细胞表面标志分析。
三．用cellquest进行仪器的设定和调整
1．从苹果画面中选取cellquest，进入cellquest后在file指令栏中打开合适的获取模式文件。
2．从屏幕上方acquire指令栏中，选取connect to cytometer(快捷键： ＋b)进行电脑和仪器的连机。将出现的acquisiton control对话框移至合适位置。
3．从cytometer指令栏中，开启detectors/amps、threshold、compensation、status等四个对话框，并将它们移至屏幕右方，以便获取数据时随时调整获取条件。也可以用 1，2，3，4获得此四个对话框。
4．在detectors/amps对话框中，先为每个参数选择适当的倍增模式(amplifier mode)：线性模式lin或对数模式log。一般进行细胞表面抗原分析如分析外周血的淋巴细胞亚群时，fsc和ssc多以线性模式lin测量，且ddm param选择fl2，而fl1, fl2与fl3则以对数模式log测量；分析细胞dna含量时，fsc，ssc，fl1，fl2，fl3皆以lin进行测量，且ddm param选择fl2；分析血小板表型时，fsc，ssc，fl1，fl2，fl3等均以log进行测量。
5．放上待检测的样品，将流式细胞仪设定于run，流速可在high 或low上。
6．在acquisiton
control对话框中，选取acquire，开始获取细胞。在以下的仪器调整过程中随时选取pause，restart以观察调整效果。未完全调整好之前不要去掉setup前的“”。
7．在detectors/amps对话框中，调整fsc和ssc探测器中的信号倍增度：pmt voltages(粗调)与amp gains(细调)，使样品信号出现在fsc-ssc点图内,且三群细胞合理分布。
8．在threshold
对话框中选择适当的参数设定threshold，并调整threshold的高低，以减少噪音信号(细胞碎片)。一般做细胞表型时用fsc－h而做dna时用fl2－h。threshold并不影响检测器对信号的获取，但可改善画面质量。
9．从屏幕左列绘图工具中选取region(区域)，并在靶细胞周围设定区域线，即通常所说的门。圈定合适的细胞群可使仪器调整更为容易。
10．detectors/amps对话框中，调整荧光检测器(fl1, fl2, fl3, fl4等)的倍增程度。根据所用的荧光阴性对照样品调整细胞群，使之分布在正确的区域内。
11．在compensation对话框中，根据所用的调补偿用标准荧光样品调整双色(或多色)荧光染色所需的荧光补偿。比如应该为fl1 fl2-
的细胞群却分布在fl1＋ fl2＋区域内，则需调大fl2－？％fl1中的“？”，并从fl1-fl2点图中观察新的调整是否恰当
12．在status对话框中可见：laser power:正常值—run/ready为14.7mw，standby为5mw；laser current:正常值为6amps左右。
13．调整好的仪器设定可在instrument settings对话框中储存，下次进行相同实验时可调出使用，届时只需微调即可。
本计算机中已有三个名叫储存于facstation g3 \bd applications \cellquest folder\imm-instrsettings及facstation g3 \bd files \instrument settings files\calibfile和mast-cell-set的参数文件，前二者可用于分析人白细胞，后者用于分析小鼠肥大细胞。
四．通过预设的获取模式文件进行样品分析
1．从苹果标志中选择cellquest，新视窗出现后从file指令栏中选择open，打开预设的获取模式文件。
2．从屏幕上方acquire指令栏中，选取connect to cytometer进行电脑和仪器的连机。将出现的acquisiton
control对话框移至合适位置。
3．从cytometer指令栏中选取instrument settings，在其对话框中选择open以调出以前存储的相同实验的仪器设定，按set 确定。
4．在acquire指令栏中，选择acquisition&storage决定储存的细胞数，参数，信号道数。其中resolution在做细胞表面标志时选择256，做dna时选择1024。parameter
saved…则根据不同的检测对象选择不同的参数。
5．在acquire指令栏中，选择parameter
description，以决定文件存储位置(folder)，文件名称(file)，样品代号以及各种参数的标记(panel)，即安排tube1，2，3…的检测参数。一般本仪器获取的数据按照检测对象的不同分别储存于facstation
g3\bd applications \cellquest \imm 和dna 文件夹中。文件根据日期命名。
6．在cytometer指令栏中，选择counters，将此对话框移至合适位置，以便于随时观察events计数。
7．将样品试管放至检测区，在acquire control对话框中选取acquire以启动样品分析测定。
8．微调仪器设定，待细胞群分布合适后选择acquire control对话框中pause, abort,
去除setup前的“”，开始正式获取信号，存储数据。
9．当一定数目的细胞被测定后，获取会自动停止，并会自动存储数据。重复步骤7，继续分析下一个样品，直到所有的样品数据分析完毕。
当所有样品分析分析完毕，即换上三蒸水，并将流式细胞仪置于“standby”状态，以保护激光管。
五．关机程序：
1．从file中选择quit, 退出软件，选择don’t save至苹果屏幕。
2．用4ml 1：10稀释的漂白水作样品，将样品置于旁位(vacuum is on)，以外管吸去约2ml，在将样品架置于中位(vacuum is
off)，再high run 5分钟(内管吸去2ml)。
3．改用三蒸水4ml作样品,同上处理。
4．按prime三次。
5．此时仪器自动转为standby状态，换2ml三蒸水。必须在仪器处于“standby”状态
10分钟后再依次关掉计算机、打印机、主机、稳压电源，以延长激光管寿命，并确保应用软件的正常运行。
6．填写使用登记表。
